La chromatographie sur couche mince
En faisant l’analogie avec les résultats de l’optique, Tswett conclut : « Tout comme les rayons lumineux d'un spectre, les différentes composantes d'un mélange de colorants se déploient sur la colonne de carbonate de calcium selon une loi et peuvent être analysées qualitativement et quantitativement ».
La chromatographie est aujourd’hui une méthode de séparation mais également d'analyse : Les constituants d'un mélange homogène sont séparés par entraînement au moyen d'un solvant (éluant ou phase mobile) sur un support (phase fixe ou stationnaire). Chaque constituant est partagé entre son affinité à rester fixer sur le support et sa solubilité dans le solvant choisi : plus une substance est soluble dans la phase mobile, plus elle est entraînée par cette phase et inversement, une substance peu soluble dans la phase mobile migre peu.
Dans le cas de la chromatographie sur couche mince, une petite
quantité du mélange à séparer est
déposée sur le support lui même placé
au contact de l’éluant. Ce dernier migre de bas en haut, par capillarité, le long du support
en entraînant les constituants du
mélange. C’est le
phénomène d’élution.
Chaque constituant migre d’une
certaine hauteur, caractéristique de la substance
(migration différentielle). Il suffit alors de
comparer la migration de ces constituants avec des
espèces chimiques de référence ou
témoins (analyse comparative).
•Choix de la phase fixe
(exemple : plaque d’aluminium recouverte de gel de
silice).
•Choix de la phase
mobile. C’est un solvant ou un mélange de
solvants. (exemple : dichlorométhane, éther de
pétrole…).
2e étape : Préparation de la cuve à chromatographie et du support.
•On verse environ 0,5 à 1 cm d’éluant dans la cuve à
chromatographie que l’on referme avec un
couvercle de manière à ce que l’éluant
sature la cuve en
vapeur;
•On trace alors un trait fin appelé ligne de base sur la plaque à
chromatographie de manière à ce que ce trait soit
au dessus du niveau de
l’éluant.
3e étape : Préparation des
dépôts. •Sur la ligne de base, on doit
réaliser les différents dépôts : le mélange et les témoins en respectant des espaces
réguliers. On place de fines croix à
l’endroit de ces dépôts et on les
repère par une lettre ou un nom.
•On doit enfin sécher ces dépôts pour
bien les fixer sur le support.
4e étape : Réalisation de la
chromatographie. • La plaque est placée dans la cuve à la verticale et le
couvercle est remis en place.
•On laisse l’éluant
migrer par capillarité et on sort la plaque
lorsque ce dernier arrive à ~0,5 cm du haut de la plaque
en y traçant un nouveau trait appelé front du solvant.
5e étape : révélation et analyse du chromatogramme par comparaison.
La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation et d’analyse des mélanges homogènes. Elle utilise le principe de la migration par capillarité (comme sur un papier buvard) d’une espèce sur un support grâce à sa solubilité dans le solvant choisi. Ensuite, par comparaison avec des espèces pures de référence, il est possible de déterminer la nature des espèces chimiques isolées.
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